酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(Enzyme-linked Immunosorbent Assay, ELISA) 技術(shù)從1970年代發(fā)展至今已近半個(gè)世紀(jì)，是一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室zui基本的免疫檢測技術(shù)，被廣泛的應(yīng)用于基礎(chǔ)研究和臨床檢驗(yàn)。那么面對(duì)市面上數(shù)以千計(jì)的試劑盒，數(shù)百家供應(yīng)商，對(duì)于剛進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室的新手或者準(zhǔn)備開展ELISA實(shí)驗(yàn)的人員， 又該如何選擇且質(zhì)量又可靠的ELISA試劑盒呢？
1. 首先選定ELISA類型
ELISA技術(shù)可用于測定抗原，也可用于測定抗體。牛ELISA檢測試劑盒 ELISA方法中有三個(gè)必要的試劑：(1) 固相的抗原或抗體，即"免疫吸附劑"（immunosorbent）；(2) 酶標(biāo)記的抗原或抗體，稱為"結(jié)合物"（conjugate）；(3) 酶反應(yīng)的底物。
一般可將ELISA分為以下幾種類型，實(shí)驗(yàn)君首先需要根據(jù)自己的待檢物來確定試劑盒類型。
1) 雙抗體夾心法：針對(duì)抗原分子上兩個(gè)不同抗原決定簇的單克隆抗體分別作為固相捕獲抗體和酶標(biāo)檢測抗體。適用于測定二價(jià)或二價(jià)以上的大分子抗原如血漿中的細(xì)胞因子，不適用于測定半抗原及小分子單價(jià)抗原。同理，也有雙抗原夾心法測抗體。
2) 直接法：將抗原直接固定在固相載體上，加入酶標(biāo)記的一抗，即可測定抗原總量。此法操作手續(xù)簡短，因無須使用二抗可避免交互反應(yīng)。
3) 間接法：間接法是檢測抗體常用的方法，其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體（抗人免疫球蛋白抗體）來檢測與固相抗原結(jié)合的待檢抗體。
4) 競爭法：小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn)，因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測定，可以采用競爭法模式。當(dāng)抗原材料中的干擾物質(zhì)不易除去，或不易得到足夠的純化抗原時(shí)，可用此法檢測特異性抗體。
2. 根據(jù)實(shí)驗(yàn)物種及待檢樣品性質(zhì)來選擇ELISA
如果實(shí)驗(yàn)君的實(shí)驗(yàn)樣品為人、小鼠或大鼠樣品，那么要選擇一個(gè)合適的試劑盒相對(duì)容易，但如果您的實(shí)驗(yàn)樣品來源于其他物種如雞、牛、猴等，則市面上能提供的試劑盒種類卻很少。且不可輕信能提供近萬種試劑盒，覆蓋多物種的供應(yīng)商。但如果又非要檢測這些物種的指標(biāo)時(shí)，要對(duì)待檢物(如有種屬差異性)進(jìn)行同源性分析以及試劑盒的種屬交叉反應(yīng)數(shù)據(jù)。對(duì)于樣品類型而言，一般的商業(yè)化試劑盒都經(jīng)過血清、血漿和細(xì)胞培養(yǎng)上清液的驗(yàn)證。在選擇試劑盒時(shí)，要詳細(xì)閱讀說明書，比如血漿樣本抗凝劑的使用是否與試劑盒兼容。另外，在某些情形下樣品中會(huì)存在干擾因素比如溶血血漿、高脂肪含量的樣品、人抗鼠抗體(HAMA)、細(xì)胞培養(yǎng)上清中含胎牛血清等。因此需根據(jù)樣品來選擇試劑盒，必要時(shí)還要根據(jù)樣本來適當(dāng)優(yōu)化?；蛟跇悠肥占?，先閱讀一些可靠供應(yīng)商試劑盒的說明書或直接咨詢。如果您的樣品為組織或細(xì)胞裂解物，則需要更謹(jǐn)慎的選擇試劑盒。市面上大多數(shù)的商業(yè)化試劑盒沒有經(jīng)過多種來源組織樣本的驗(yàn)證。這需要實(shí)驗(yàn)君能理解不是所有試劑盒所用的抗體對(duì)，都能特異的從一堆裂解物蛋白中特異檢出您的目的蛋白，還要考慮組織樣品的基質(zhì)效應(yīng)(Matrix Effect)等。
3. 細(xì)致比較試劑盒關(guān)鍵性技術(shù)參數(shù)
ELISA試劑盒的關(guān)鍵技術(shù)參數(shù)包括板內(nèi)差異性、板間差異性、批間差異性、重復(fù)性、特異性及交叉反應(yīng)性、回收率等。如果實(shí)驗(yàn)君經(jīng)常開展ELISA實(shí)驗(yàn)，建議使用同一的試劑盒，這樣可盡量保證數(shù)據(jù)的重復(fù)性(當(dāng)然前提是實(shí)驗(yàn)條件的一致性)。對(duì)于科研用的定量ELISA試劑盒，不同的使用的抗體對(duì)、酶以及底物、工藝和實(shí)力不盡相同，自然不同試劑盒測出的數(shù)據(jù)會(huì)有差異。
4. 根據(jù)樣品中檢測物水平來選擇試劑盒
如果實(shí)驗(yàn)君對(duì)于樣品中待檢物的水平?jīng)]有任何可參考的數(shù)據(jù)，選擇寬動(dòng)力學(xué)檢測范圍的試劑盒。如果樣品中待檢物的含量很低，建議選擇高靈敏度的試劑盒。為了降低基質(zhì)效應(yīng)，有必要用稀釋液至少做2倍稀釋。如果樣品中待檢物含量遠(yuǎn)超過試劑盒的檢測范圍（標(biāo)曲范圍）， 也需做適當(dāng)?shù)谋稊?shù)稀釋。在zui后計(jì)算結(jié)果時(shí)，需乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
5. 根據(jù)樣本可獲得性來選擇試劑盒
通常而言，商業(yè)化試劑盒的樣品用量都在50ul或100ul, 但也有一些供應(yīng)商的試劑盒對(duì)樣品的用量要求可少至10ul。如果您的樣品很珍貴或較難獲取，則需要認(rèn)真考慮試劑盒對(duì)樣品用量的要求。如果樣品量少，且要做多因子檢測時(shí)更需謹(jǐn)慎。
在線客服
會(huì)員_a.png)